Spektrofotometre kullanılarak DNA konsantrasyonu nasıl hesaplanır?
Spektrofotometre kullanılarak DNA konsantrasyonu nasıl hesaplanır?

Video: Spektrofotometre kullanılarak DNA konsantrasyonu nasıl hesaplanır?

Video: Spektrofotometre kullanılarak DNA konsantrasyonu nasıl hesaplanır?
Video: Spektrofotometri Örnekleri (Fen Bilimleri) (Kimya) 2024, Kasım
Anonim

DNA konsantrasyonu NS tarafından tahmin edilen 260nm'de absorbansın ölçülmesi, A'nın ayarlanması260 bulanıklık ölçümü ( tarafından ölçüldü 320nm'de absorbans), çarpma tarafından seyreltme faktörü ve kullanarak bir A olan ilişki260 1.0 = 50ug/ml saf dsDNA.

İnsanlar ayrıca, DNA'nın konsantrasyonunu ve saflığını nasıl buluyorsunuz?

Değerlendirmek DNA saflığı , diğer olası kirleticileri tespit etmek için 230nm'den 320nm'ye kadar absorbansı ölçün. En genel saflık hesabı 260nm'deki absorbansın 280nm'deki okumaya bölümüdür. İyi kalite DNA A'ya sahip olacak260/A280 1.7–2.0 oranı.

Aynı şekilde, iyi bir DNA konsantrasyonu nedir? A iyi kalite DNA örnek A olmalıdır260/A280 1.7-2.0 oranı ve bir A260/A230 oranı 1.5'ten büyüktür, ancak farklı tekniklerin bu kirleticilere duyarlılığı değiştiğinden, bu değerler yalnızca numunenizin saflığı için bir kılavuz olarak alınmalıdır.

Bununla ilgili olarak, NanoDrop DNA konsantrasyonunu nasıl hesaplar?

260 nm'de absorbans değerini sabit bir faktörle çarparsınız (bunun için 50'dir). DNA ) ve elde edersiniz DNA konsantrasyonu . işte. (Tamam, teknik olarak 50 ile çarpılmış 10 mm kalınlığındaki bir numunenin A260'ı; NanoDrop A260'ı standart bir küvette olduğu gibi numune 10 mm kalınlığındaymış gibi ifade eder).

DNA'mızı ölçmek için neden bir spektrofotometre kullanmak zorunda kaldık?

A spektrofotometre nükleik asitlerin ortalama konsantrasyonlarını belirleyebilir DNA veya bir karışımda bulunan RNA ve bunların saflığı. kullanma Beer-Lambert yasası NS soğurulan molekülün konsantrasyonu ile soğurulan ışık miktarını ilişkilendirmek mümkündür.

Önerilen: