PCR ürün saflaştırmasının amacı nedir?

2024 Yazar: Miles Stephen | [email protected]. Son düzenleme: 2023-12-15 23:41

arıtma DNA'nın bir PCR reaksiyon tipik olarak akış aşağı kullanım için gereklidir ve enzimlerin, nükleotidlerin, primerlerin ve tampon bileşenlerinin çıkarılmasını kolaylaştırır. Geleneksel olarak bu, fenol kloroform ekstraksiyonu ve ardından etanol çökeltmesi gibi organik ekstraksiyon yöntemleri kullanılarak gerçekleştirildi.

Ayrıca soru şu ki, PCR ürünlerini saflaştırmak neden gerekli?

Gerek PCR ürünlerini arındırın ligasyonun başarısını optimize etmek için kullanılmayan primerlerden, nükleotidlerden ve enzimlerden kurtulmak, ürün ile ilgili PCR . NS arındırmak NS PCR ürünleri , boyut dışlama kromatografisi kullanılır.

Ek olarak, PCR'den sonra ne yapmalıyım? Geri kazanımı en üst düzeye çıkarmak için, filtre edilmeyen kabı 10 ila 20 µL TE veya su ile iki kez durulayın. Son PCR reaksiyon, çeşitli moleküler biyoloji uygulamaları için kullanılabilen bir mikrograma kadar amplifiye DNA içerebilir. Bu uygulamalar, ürünün kalıntı bileşenlerine az ya da çok duyarlı olabilir. PCR reaksiyon karışımı.

Ayrıca PCR ürünlerini nasıl temizliyorsunuz?

kullanılan klasik yöntemler temiz yukarı PCR ürünleri dizilemeden önce jel elektroforezi, etanol çökeltmesi ve kolon kromatografisi dahildir. Oldukça etkili olmakla birlikte, bu yöntemler birden fazla numuneyi paralel olarak işlerken ve değişen derecelerde numune kaybı sergilerken hızla külfetli hale gelebilir.

DNA neden temizlenmeli?

Biz temiz yukarı DNA Aşağı akış uygulamalarını etkileyebilecek tampon tuzları, enzimler veya diğer maddeleri uzaklaştırmak için sulu çözeltilerden. Örnekler, PCR reaksiyonunu içerir temiz yukarı, temiz kısıtlama özetlerinden sonra yukarı ve temiz genomik veya plazmit DNA hücresel proteinler/enkaz ile kontamine.