Bir ligasyonu dönüştürmenin maliyeti nedir?

2024 Yazar: Miles Stephen | [email protected]. Son düzenleme: 2023-12-15 23:41

dönüşüm . 1-5 µl arasında ekleyin ligasyon için yetkin hücrelere karışım dönüşüm . Genişletilmiş ligasyon PEG ile bir düşüşe neden olur dönüşüm verimlilik (Hızlı ligasyon Kit). Büyük yapılar (>10, 000 bp) için elektroporasyon önerilir.

Bu nedenle, dönüşüm için ne kadar ligasyon ürününe ihtiyacım var?

dönüşüm . 1-5 µl arasında ekleyin ligasyon için yetkin hücrelere karışım dönüşüm . Genişletilmiş ligasyon PEG ile bir düşüşe neden olur dönüşüm verimlilik (Hızlı ligasyon Kit). Büyük yapılar (>10, 000 bp) için elektroporasyon önerilir.

Daha sonra soru şu, Ligasyon ve transformasyon nedir? Tipik bir klonlama deneyinde, araştırmacılar önce bir gen gibi bir DNA parçasını plazmit adı verilen dairesel bir DNA parçasına sokarlar. Bu adım, kısıtlama enzimlerini ve DNA ligazını kullanır ve ligasyon . sonra ligasyon Bir sonraki adım, DNA'yı bakteri adı verilen bir süreçte bakterilere aktarmaktır. dönüşüm.

Daha sonra, bir ligasyon için ne kadar DNA'ya ihtiyaç duyulduğu da sorulabilir.

Verimlilik için vektör + ekin toplam konsantrasyonu 1-10 µg/ml arasında olmalıdır. ligasyon . Vektör: 1:1 ile 1:10 arasındaki molar oranların eklenmesi önerilir (1:3 tipiktir). Eğer emin değilseniz DNA konsantrasyonlarda, değişen oranlarda çoklu ligasyonlar gerçekleştirin.

Bir ligasyon reaksiyonunu ne kadar süre saklayabilirsiniz?

Ligasyonlar oda sıcaklığında veya daha soğukta (12-16°C'yi düşünün) gece boyunca veya hatta birkaç günlüğüne yapın, Eğer sen gerçekten meşgulüz. Yapabilirsiniz Ayrıca ligasyon depolamak buzdolabında ve daha sonra oda sıcaklığında bağlamaya devam etmek için çıkarın. uzun gerektiği gibi.